濟(jì)南九望紫外可見近紅外分光光度計(jì)

1、基本工作原理

1）吸收的本質(zhì)：分光光度法是利用物質(zhì)對不同波長光的選擇吸收特性而建立起

來的分析方法。通常利用棱鏡或光柵分光來取得單色光，使單色光連續(xù)地依次通

過溶液，并測得該溶液對每一波長的吸收，得到吸收光譜曲線。

 吸收光譜來源于物質(zhì)對光的選擇吸收，這是物質(zhì)的宏觀現(xiàn)象，而吸收的本質(zhì)

是分子內(nèi)部運(yùn)動和光相互作用的結(jié)果。當(dāng)物質(zhì)的分子吸收一定能量或波長的光譜

后，透過的光譜中有些波長被吸收就形成了吸收光譜。吸收的能量愈小，則相應(yīng)

的光的波長，吸收峰出現(xiàn)在較長波段。當(dāng)吸收在紅外區(qū)時(shí)形成紅外吸收光譜，如

果吸收能量愈大，則相應(yīng)的波長愈短，吸收峰出現(xiàn)在較短波段，當(dāng)吸收在紫外區(qū)

產(chǎn)生紫外吸收光譜。

2）吸收定律—朗伯比耳定律：當(dāng)一束平行單色光通過均勻的溶液時(shí)，其吸光度

與溶液的濃度和厚度的乘積成正比。

其數(shù)字表達(dá)式：A=KCL=LogI0/I=-LogT

吸收定律數(shù)字表達(dá)式成立的前提：①，入射光為單色光，②，吸收過程中各

物質(zhì)無相互作用，各物質(zhì)吸光度具有加和性，③，光與物質(zhì)的作用僅限于吸收過

程，沒有熒光散射和光化學(xué)現(xiàn)象，④，吸收物是一種均勻分布的連續(xù)體系，

3）影響分光光度法的原因：

a，輻射與物質(zhì)的非吸收作用引起的誤差，

b，熒光與光化學(xué)反應(yīng)的影響，一般說來，熒光對分光光度測量產(chǎn)生的誤差

可以忽略，多數(shù)情況下顯色體系的熒光效率很小，而且熒光發(fā)射是各向同性，只

有一小部分沿著透射光方向進(jìn)入檢測器，使測量吸光度偏低，產(chǎn)生負(fù)偏離。熒光

 對吸收測量的影響極大程度上決定于儀器的吸收池和檢測器光學(xué)設(shè)計(jì)，

 c，反射和散射，吸收定律只適用于均勻介質(zhì)的吸收體系，渾濁溶液因散射

使實(shí)測吸光度增加，導(dǎo)致偏離比耳定律，

d，儀器的非理想性引起的誤差，

 e，復(fù)色光對比耳定律的偏離，大多數(shù)光度計(jì)只能獲得接近于單色光的狹窄

的光通帶，實(shí)際上仍是有復(fù)色光性質(zhì)，可導(dǎo)致偏離比耳定律。偏離的大小取決于

二單色光的摩爾吸光系數(shù)差△ε，|△ε|很小時(shí)，可近似認(rèn)為是單色光，在低濃

度時(shí)，工作曲線仍為直線，但濃度較大時(shí)，隨濃度增大，A-C曲線彎曲愈嚴(yán)重，

故比耳定律只適用于稀溶液，

f 雜散光，雜散光是指進(jìn)入檢測器的處于待測波長光譜帶寬范圍外的不需要

的其它波長組分。其主要來源于分光光度計(jì)色散元件棱鏡或光柵、反射鏡、透鏡

表面的散射，單色器內(nèi)壁灰塵及其它元件傷痕的反射和漫射等，雜散光可引起嚴(yán)

重的測量誤差。在儀器能量處于最小的波長處，雜散光通常處于最大值（如氘燈

220nm,鎢燈 340nm），

g，狹縫寬度，狹縫寬度不僅影響光譜的純度，也影響吸光度值。在定量分

析時(shí)，為了得到足夠的測量信號，應(yīng)采用較大的狹縫，在定性分析時(shí)則采用較小

的狹縫，當(dāng)出射狹縫和入射狹縫的寬度相等時(shí)，狹縫寬度引起的誤差最小，

 h，波長標(biāo)度尺的誤差，波長標(biāo)度尺即儀器的波長準(zhǔn)確度，如誤差較大或未

作校正，將光譜測量產(chǎn)生誤差，即影響吸光度測量的準(zhǔn)確度（在吸收光譜的尖峰

處更為顯著），

 i，不平行入射光的影響，比耳定律的前提條件之一是采用平行入射光束，

以保證全部光束通過同一厚度的吸收介質(zhì)，當(dāng)入射光束偏離平行性較大時(shí)，就明

顯導(dǎo)致偏離比耳定律。如果儀器中光束中等強(qiáng)度偏離平行性，引起的吸光度測量

誤差一般在 0.5%以內(nèi)；

j，光度標(biāo)尺的誤差，光度標(biāo)尺即透射比準(zhǔn)確度，其誤差大小直接影響光度

測量的準(zhǔn)確度。

2、性能指標(biāo)釋義

 1）光學(xué)系統(tǒng)：通常是指光學(xué)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)形式，目前，國際國內(nèi)光度計(jì)行業(yè)常采

用的機(jī)構(gòu)為自準(zhǔn)式和 CT式兩種結(jié)構(gòu)；

 2）波長范圍：指光度計(jì)所能進(jìn)行測試的波長最大值和最小值之差；

 3）波長準(zhǔn)確度 儀器顯示波長與真實(shí)波長的接近程度，即儀器設(shè)定波長與實(shí)際波

 長的差值。每臺光度計(jì)都要在很多個(gè)波長點(diǎn)檢查波長準(zhǔn)確度；波長準(zhǔn)確度是分光

 光度計(jì)的一項(xiàng)重要技術(shù)指標(biāo)，它對定性、定量及結(jié)構(gòu)分析結(jié)果影響極大。

 4）波長重復(fù)性：波長重復(fù)性是儀器返回原波長的能力。它體現(xiàn)了波長驅(qū)動機(jī)械

和整個(gè)儀器的穩(wěn)定性；

 5）光譜帶寬（靈敏度，分辨力）：指一個(gè)尖峰光譜帶通過單色器出狹縫時(shí)，在檢

 測器上所檢測到的能量半寬度，用波長單位 nm 表示，從另一個(gè)角度理解這一概

 念會更通俗易懂：首先，單色器出狹縫不僅僅代表著狹縫的物理尺寸或幾何尺寸，

 他還代表著光學(xué)意義，這就是光譜帶寬，我們知道，來自單色器的光線不全是單

 一波長的光，而是一個(gè)狹窄的按波長大小順序排列的光譜帶，這一光譜帶包含波

 長的多少，用光譜帶寬來表示。光譜帶寬直接反應(yīng)的是從單色器出來的光的單色

 性的好壞程度。該指標(biāo)與儀器的分辨力和靈敏度很相似，但又有所不同，他們從

 不同的側(cè)面反應(yīng)光度計(jì)性能的好壞。分辨力是指儀器分辨兩相鄰波長大小的能

力，

 靈敏度是指在做低濃度測量時(shí)，當(dāng)濃度改變一個(gè)單位時(shí)在檢測器上所引起信號的

 變化量，它受校正曲線（標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度為橫軸，吸光度為縱軸）和儀器本身精密

 度的限制。兩種測量方法精密度相同時(shí)，校正曲線斜率越大越靈敏，而斜率相等

 時(shí)，精密度越高靈敏度越好。需要指出的是，為了得到準(zhǔn)確的測試結(jié)果，儀器的

光譜帶寬（Spectral Bandwith 簡稱 SBW）和分析樣品的自然帶寬（Natural

 Bandb 簡稱 NBW）之比應(yīng)小于 0.1 , 這樣可以得到 99.5% 以上的測量準(zhǔn)確

 度。

 6）雜散光：雜散光是非選擇波長的光照射到檢測器上產(chǎn)生的信號。它是光度計(jì)

分析誤差的一個(gè)重要來源，雜散光大會限制高濃度溶液分析的準(zhǔn)確性。雜散光用

T%表示；

 7）光度范圍：指光度計(jì)在滿足各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)下的測試范圍，用 A或 T表示；

 8）光度準(zhǔn)確度：指多次測定的平均值與真實(shí)值符合的程度；檢查光度準(zhǔn)確度，

通常是利用經(jīng)過仔細(xì)反復(fù)測量的中性濾光片作為標(biāo)準(zhǔn)光度片來檢測的。中性濾光

片是一種對一定波長范圍內(nèi)的光具有幾乎相同的透射比（或吸光度）的濾光片，

利用它對波長變化及帶寬變化不敏感的特性，來檢查儀器的光度準(zhǔn)確度和重復(fù)

性。